DNA降解影响吸光度吗，dna降解影响吸光度吗知乎
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1、为什么说DNA溶液在Tm温度时,吸光度为最大值一半是错的
解链温度（Tm）又称为融解温度，是指DNA解链过程中，溶液在260nm处的吸光度达到最大值一半时所对应的温度，在此温度时，50%的DNA双链解离成单链。
主要是因为这些反应最终的结果都是一样的，比如一段20bp长的DNA和200bp长的DNA，最高温度都是——比如——95度，如果选择这个温度，就无法体现出两者的差异了。
当吸光度增加约40%后，变化趋于平缓，表明两条链已完全分开。这种变化类似于结晶的熔解过程。因此，Tm值是指将260nm波长下吸光值的增加量达到最大增量一半时的温度。
Tm值的定义：Tm值就是DNA熔解温度，指把DNA的双螺旋结构热变性过程中紫外吸收值达到最大值的1/2时的温度。不同序列的DNA，Tm值不同。DNA中G－C含量越高，Tm值越高，成正比关系。
2、为什么提取dna紫外光谱鉴定时A260/A280大于2
一般来说，如果A260/A280小于8，则说明有可能存在污染物质，如果大于0，则表明DNA的质量较好。
/280在84左右一般是DNA比较大，结构比较紧实的时候的值；对于引物这种寡核苷酸，260/280超过0很多，同时比较短的双链DNA或者结构比较松散的双链DNA260/280都会升高。你测出0，估计是因为你的产物比较短吧。
A260/A280值正常区间应位于7-0范围内；如落于此区间外，属于比值异常，意味着提取的DNA中有蛋白或RNA污染。
纯净的样品比值大于8（DNA）或者0（RNA）。A230表示样品中存在一些污染物，如碳水化合物、盐（胍盐）等，较纯净的核酸A260/A230的比值大于0 。
3、为什么一个DNA样品去螺旋之后紫外吸收增加?
DNA紫外吸收升高是因为双螺旋结构使碱基对的π电子云发生重叠，因而减少了对紫外光吸收。如果解开双螺旋结构，则吸光度增加。
DNA单链状态吸收比双链要高，所以同样的吸收对应的DNA含量是不同的。而同样的DNA在解旋之后紫外吸收也会增大。因为碱基配对过程中嘌呤嘧啶环之间就有了电子的相互影响，造成吸收有变化。
因为DNA双链解链后，更多的共轭双键得以暴露，所以紫外吸收峰会升高。
DNA的变性后性质改变主要表现：粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等。通常，可利用DNA变性后波长260nm处紫外吸收的变化追踪变性过程。
4、ss-DNA降解后会不会影响其吸光度值
单链DNA在分子流体力学性质、吸收光谱、碱基反应性质等方面都和双链DNA不同。某些噬菌体粒子内含有单链环状的DNA，这样的噬菌体DNA在细胞内增殖时则形成双链DNA。
作为一个成熟的学生实验，各种试剂的量应该都是足够的，最可能的原因是操作不熟练，导致DNA断裂、降解较多，小片段及单链DNA的增色效应导致吸光度增加.水浴消化温度、时间等也可能造成影响。这种实验有些降解无法避免，没关系。
吸光度这与rna中的碱基有关，与分子结构无关，所以当然能测出值来。并且，降解和片段化的程度越高，暴露出的碱基愈多，吸光度也越大，测出的值当然也越高，这是不矛盾的。
解链温度（Tm）又称为融解温度，是指DNA解链过程中，溶液在260nm处的吸光度达到最大值一半时所对应的温度，在此温度时，50%的DNA双链解离成单链。
DNA钠盐的紫外吸收在260nm附近有最大吸收值（图3-25），其吸光率（absorbance）以A260表示，A260是核酸的重要性质，在核酸的研究中很有用处。在230nm处为吸收低谷，RNA钠盐的吸收曲线与DNA无明显区别。不同核苷酸有不同的吸收特性。
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