材料dna降解会导致测错不,材料dna降解会导致测错不过吗
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1、降解的DNA能做PCR吗
相对定量PCR是能做的,但是做出来的真实性就不敢保证了。通过内参基因的矫正,可以作为你后续实验的借鉴。但是如果是非常重要的结果,可能奠定你以后实验的思路的话,建议还是用新鲜的标本再做一次。最好是要验证RNA的完整性。
定性的最长能达到2K以上。一般情况来说,越短扩增效率越高。RNA做RT-PCR也一样。DNA直接做PCR,而RNA则须先做RT-PCR,然后再进行荧光定量PCR扩增,目前市面上最常见的是一步法,将两个反应连接在一起完成。
一般情况下,问题不大,pcr对纯度不敏感,可以试试再说。提取RNA测浓度时 A260/A280 大于3的原因可能是降解。一般对于DNA,纯净的时候比值是8,而对于RNA则是接近0。
~2是正常的,5太高了。有条带说明还没有全部被降解,但是用于定量已经完全不可靠了。
2、哪些因素会影响DNA含量的测定
DNA的纯度和完整性是影响二苯胺法测定DNA浓度的重要因素,DNA样品受到外源性因素影响,如酶作用、脱水等,都会影响测定的准确度,因此需要先进行DNA纯化、处理等步骤。
光学路径的误差,测量环境影响。超微量分光光度计测DNA浓度时,浓度变化受到样品制备溶液混合不均匀性、光学路径误差、测量环境影响因素影响。
杂质多且溶解液量少,导致DNA浓度过高。 在加入细胞裂解缓冲液前,未能使细胞均匀分散,从而导致DNA团块形成。 提取的DNA溶解液过少,浓度过大。 电泳检测时操作不慎,导致DNA成涂布状。
Tm值的影响因素如下:(1)G—C的含量:在一定条件下Tm高低由DNA分子中的G-C含量所决定。G-C含量高时,Tm值比较高,反之则低。这是因为G-C之间的氢键较A-T多,解链时需要较多的能量之故。
3、DNA刚刚稀释了几天就与刚稀释的不同,PCR结果出现差异
根本原因应该是RNA纯度不够,导致反转录的cDNA浓度低。
大。有极大可能影响实验结果。实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。
稀释问题。pcr给药组比空白组低是在实验中的稀释问题导致的,使用了不同的稀释用量。pcr是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。
非特异性条带的出现,其原因:一是引物与靶序列不完全互补、或引物聚合形成二聚体。二是Mg2 离子浓度过高、退火温度过低,及PCR循环次数过多有关。
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