rna降解教程(rna降解后浓度的变化)
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1、如何去除DNA样品中的RNA
DNA样品中加适量RNA酶(0.1~0.3ul) 37 ℃水浴保温30min。DNA样品放一段时间,RNA自动降解因为RNA没有比DNA稳定。DNA溶于酚但是RNA不溶。
先用酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提,这时候经常在样品中会有酚残留,所以之后再用氯仿:异戊醇(24:1)抽提,将酚抽干净,以免影响后续的实验。
DNA中混有RNA和蛋白质,去除方法:1,首先溶解样品。2,加氯仿,15000rpm 4度 15分钟离心。3,上层(水层RNA),中间层(半固体),下层(有机溶剂层DNA,加乙醇可沉淀出来)。
通过下述方法,可以从质粒制品中去除RNA。通过Bio-Gel A-150m或Sepharose CL-4B进行层析 制备质粒DNA。 有等体积的经TE(pH0)平衡后的酚抽提1次。
DNA提取过程中,去除RNA的常用方法是乙醇沉淀。因为RNA不溶于醇,乙醇能够消除RNA的水化层,使带负电荷的磷酸基团暴露出来。Na之类的平衡离子能够与这些带电基团结合,在沉淀形成部位降低多核苷酸链之间的排斥作用。
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