防止蛋白降解的办法-如何阻止蛋白流失
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1、如何抑制蛋白酶的活性以防止其降解我们所需的蛋白质产品?
由于蛋白酶抑制剂在液体中的溶解度极低,尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂的沉淀。
蛋白酶抑制剂主要有:奈非那韦、沙奎邦韦、茚地那韦、安泼那韦、利托那韦、洛匹那韦及复合制剂。蛋白酶抑制剂是基于肽类的化合物,它们或竞争性抑制蛋白酶活性或作为互补蛋白酶活性点的抑制剂。
温度高会导致组成蛋白变质失活。DNA粗提取时温度会影响其在NaCl溶液中的溶解度,溶解度高则不会析出。所以要低温。
因此胃蛋白酶应保存在低温环境中(-20℃至-80℃),以防止其发生自降解。储存于pH值大于11的溶液中或对其进行还原性甲基化也可以有效防止自降解的发生;当pH值回到6时,胃蛋白酶的活性即可恢复。另外它在体内对胃壁也会有一定伤害,所以都以酶原形式存在于胃中,需要一个酶原激活过程。
温度可以影响蛋白质的空间结构及其功能。最典型的是酶 酶的活性会随温度的升高先变大后变小,最终为零。低温会抑制酶的活性,但不会使其失活,因为没有改变组成酶的蛋白质的空间结构。高温会使酶永久失活,因为改变了组成酶的蛋白质的空间结构。
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