核酸降解pcr影响(核酸降解pcr影响结果吗)
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1、pcr反应对模板DNA浓度的最低要求是多少?
模板DNA浓度主要看你的PCR扩增体系所使用的酶: 1、一般普通的酶,DNA模板量在50到100ng都可以扩增出来的 2、高效一点的酶,几ng也可以扩增出来的。
1、PCR反应步骤:类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成 2、PCR反应五要素:①引物(Primer)、②酶 (Taq DNA Polymerase) 、③dNTP(dATP, dGTP, dCTP, dTTP)、④模板(Template)、⑤Mg2 (Magnesium) 3、引物: 引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。 4、酶及其浓度:目前有两种Taq DNA聚合酶供应,一种是从栖热水生杆菌中提纯的天然酶,另一种为大肠菌合成的基因工程酶。催化一典型的PCR反应约需酶量2.5U(指总反应体积为100ul时),浓度过高可引起非特异性扩增,浓度过低则合成产物量减少。5、模板核酸的量与纯化程度,是PCR成败与否的关键环节之一,传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是: 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS 还能与蛋白质结合而沉淀; 蛋白酶K能水解消化蛋白质,特别是与DNA结合的组蛋白,再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份,用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本,可采用快速简便的方法溶解细胞,裂解病原体,消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离,直接用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法,要防止RNase降解RNA。6、PCR扩增条件包括温度、时间和循环次数。关于核酸降解pcr影响和核酸降解pcr影响结果吗的介绍到此就结束了,不知道你从中找到你需要的信息了吗 ?如果你还想了解更多这方面的信息,记得收藏关注本站。 核酸降解pcr影响的介绍就聊到这里吧,感谢你花时间阅读本站内容,更多关于核酸降解pcr影响结果吗、核酸降解pcr影响的信息别忘了在本站进行查找喔。