脂质体降解试剂(脂质的降解)
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1、原核表达和分泌表达的区别?
区别主要在表达重组元件还有基因标记。promoter,terminater是宿主识别的的,真核可能还需要enhancer,重组到基因组中的话,需要介导重组的序列。筛选标记绝大多数不一样。 真核表达载体在宿主中以质粒形式存在的,可以复制。哺乳动物细胞里没有质粒,外源基因整合到基因组中的,所以不能扩增。由于整合多个位点而产生多拷贝。 如果说载体的重组,没区别,都是一样的酶切加连接。细菌转化也一样。真核载体在细菌中也可以进行增值。 表达的话,一般原核是直接转化细菌通过ISPG诱导进行表达,蛋白表达后的形式一般是通过包涵体或者是分泌型蛋白存在,这种蛋白如果是真核基因来源,不一定拥有相应的蛋白生物活性,因为原核表达缺少真核转录后的蛋白修饰机制。但是原核表达的蛋白容易纯化,很容易获得纯化蛋白做为免疫原等进行使用。 而真核表达则是通过脂质体或者是PEI的等转染试剂在体外通过和质粒形成复合体, 将质粒导入细胞后进行瞬时表达。称为瞬时表达的原因是因为质粒在真核细胞中不能扩增。并且不断被细胞所降解,这种表达在一定的时间后就会消失。除非质粒被整合进入细胞的基因组,通过质粒上带的筛选标记,如G418等,通过筛选得到一株稳定表达你的目的蛋白的细胞克隆。但是这种细胞克隆的表达量相比瞬时表达会非常低甚至于检测不到。真核表达的特点是所表达的蛋白一旦表达即拥有相应的生物学活性,因此真核瞬时转染往往用于研究单个基因在细胞中的功能。而不能用于纯化蛋白。 此外,真核表达还有用于昆虫细胞的杆状病毒表面展示系统,其本质也是通过转染含有目的基因的重组质粒(特殊质粒,专用于杆状病毒表面展示系统)给昆虫细胞,然后使用野生型的杆状病毒或者是人工改造过的杆状病毒来感染相应的细胞,来是病毒和质粒在昆虫细胞体内发生重组,获得目的基因,并且最终表达于病毒子的表面,所以成为表面展示系统。
原核表达和分泌表达区别如下:
表达载体不同 。原核表达是表达载体在宿主中以质粒形式存在,可以复制。哺乳动物细胞里没有质粒,外源基因整合到基因组中的,所以不能扩增。分泌表达是真核表达载体在宿主中以质粒形式存在,可以复制。
重组元件不同 。原核表达的重组元件比较简单。分泌表达的重组元件除了启动子和终止子外,还包括内含子序列和外显子序列。
筛选标记不同 。原核表达绝大多数使用抗生素作为筛选标记。分泌表达则使用不同的标志物进行筛选。
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原核表达和分泌表达是两种不同的基因表达方式,它们的区别如下:
1. 原核表达:原核表达是指在原核细胞(如大肠杆菌)中,通过体外转录或逆转录等手段,将mRNA翻译成蛋白质的过程。原核表达的特点是可以在体外进行,不需要细胞培养和转染等步骤,并且可以通过原核细胞对蛋白质进行鉴定和筛选。但是,原核表达的蛋白质可能缺乏细胞内信号序列和跨膜结构域等细胞内结构,因此可能无法在哺乳动物细胞中发挥作用。
2. 分泌表达:分泌表达是指在哺乳动物细胞中,将编码蛋白质的基因插入哺乳动物细胞的质粒或基因组中,通过细胞内信号序列引导,将蛋白质分泌到细胞外的方式。分泌表达的特点是可以在哺乳动物细胞中进行,并且可以获得具有细胞内结构的蛋白质。但是,分泌表达需要细胞培养和转染等步骤,并且需要进行蛋白质的鉴定和筛选。
原核表达和分泌表达是两种不同的基因表达方式,其主要区别在于表达产物的目的和位置。
原核表达是指在原核生物(如细菌)中发生的基因表达过程。在原核生物中,基因的转录和翻译可以直接在细胞质中进行,由核糖体合成蛋白质。原核表达通常用于生产大量的蛋白质或其他功能分子,例如用于研究、医药等领域。表达的产物会在细菌细胞内积累。
而分泌表达是指基因表达产物(通常是蛋白质)经过特定途径被转运或分泌到细胞外环境中。这种表达方式通常涉及到特定的信号序列或靶向蛋白,使其在翻译后能够进一步经由内质网和高尔基体等细胞器的加工和运输,最终被释放到细胞外。分泌表达可用于生产分泌型蛋白质,如激素、酶等,以便在医学、工业等领域得到应用。
总的来说,原核表达适用于在细菌细胞中大量产生目标蛋白质,而分泌表达则适用于需要将表达产物从细胞内转运或分泌到细胞外的情况。两种表达方式的选择取决于对目标基因表达产物的需求以及研究或应用的具体要求。
原核表达和分泌表达在细胞内和细胞外的位置以及机制上有着明显的区别。
首先,原核表达是指基因在原核生物(如细菌)中的表达过程。
在原核生物中,DNA直接转录成RNA,然后RNA直接翻译成蛋白质。
这个过程通常发生在细菌的细胞质中,因此,原核表达的产物蛋白质通常留在细菌的细胞内。
而分泌表达则指基因在细胞内转录和翻译后,产生的蛋白质能够被分泌到细胞外。
分泌表达通常发生在真核生物中,如哺乳动物细胞。
在分泌表达过程中,蛋白质被进一步加工和修饰,然后被封装进膜泡或高尔基体,最终通过胞吐作用将其释放到细胞外环境。
总结起来,在于其发生的位置和机制。
原核表达发生在细菌的细胞质中,产物蛋白质留在细胞内,而分泌表达则是蛋白质经过加工和修饰后,被分泌到细胞外。
这两种表达方式在生物学研究和生物工程领域具有重要的意义和应用。
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