大家好,今天小编关注到一个比较有意思的话题,就是关于核酸降解对pcr结果影响的问题,于是小编就整理了3个相关介绍核酸降解对pcr结果影响的解答,让我们一起看看吧。

  1. RNA发生降解是否影响PCR的真实性?
  2. 动物组织rna降解会影响后续的rt-pcr吗
  3. DNA降解对PCR终产物有哪些影响

1、RNA发生降解是否影响PCR的真实性?

~2是正常的,5太高了。有条带说明还没有全部被降解,但是用于定量已经完全不可靠了。

相对定量PCR是能做的,但是做出来的真实性就不敢保证了。通过内参基因的矫正,可以作为你后续实验的借鉴。但是如果是非常重要的结果,可能奠定你以后实验的思路的话,建议还是用新鲜的标本再做一次。最好是要验证RNA的完整性。

如果轻度的降解,是能够做pcr的,但是,作pcr的意义已经不大了,因为你不知道有多少降解。定量就不准确了!所以,在提rna的时候,所有用品都要用rnaase-free的用品,一般0.1%depc处理即可。

影响荧光PCR的因素很多,但从操作和技术上来讲应该要注意一下几点:RNA的完整性 因为RNA一旦降解所定量的结果就不能正确反映样品中mRNA的量,所得的结果也是错误的。

因为pcr是人工合成的引物,rna在体外不稳定,而且容易被rna酶污染,容易降解。所以用dna做pcr的引物。

2、动物组织rna降解会影响后续的rt-pcr吗

如果轻度的降解,是能够做PCR的,但是,作PCR的意义已经不大了,因为你不知道有多少降解。定量就不准确了!所以,在提RNA的时候,所有用品都要用RNAase-free的用品,一般0.1%DEPC处理即可。

~2是正常的,5太高了。有条带说明还没有全部被降解,但是用于定量已经完全不可靠了。

相对定量PCR是能做的,但是做出来的真实性就不敢保证了。通过内参基因的矫正,可以作为你后续实验的借鉴。但是如果是非常重要的结果,可能奠定你以后实验的思路的话,建议还是用新鲜的标本再做一次。最好是要验证RNA的完整性。

应该还可以吧,零下20度下细胞的活性应该和在零下80度下差不多。

3、DNA降解对PCR终产物有哪些影响

PCR扩增原则上对你模板要求不高,因此单纯降解对PCR结果影响不大,除非你做长PCR,或者进行多态分析(如RAPD)。但是你单纯用酚-氯仿抽提,可能会造成DNA里面蛋白、酚、氯仿和其他杂质较多,因此会影响PCR结果。

有可能,如果是降解成碎片段,然后你用的是TA连接,即用T载体连接PCR产物,是可能会出现一些缺失了部分片段的重组子的(其实,除非降解的很严重,问题也不会太大。

④变性剂:各种变性剂主要是干扰碱基堆积力和氢键的形成而降低Tm值。⑤DNA双链本身的长度。

也有介绍为在热,光,机械力,化学试剂,微生物等条件下聚合物发生分子链的无规则断裂,侧基和低分子的消除反应,使聚合度和相对分子质量下降。但DNA与RNA还可发生水解。

当然有影响,但是否有质的影响就不一定了。试一试就知道了。

到此,以上就是小编对于核酸降解对pcr结果影响的问题就介绍到这了,希望介绍关于核酸降解对pcr结果影响的3点解答对大家有用。