rna降解能做qpcr（rna降解 qpcr）
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1、降解的DNA能做PCR吗?
相对定量PCR是能做的，但是做出来的真实性就不敢保证了。通过内参基因的矫正，可以作为你后续实验的借鉴。但是如果是非常重要的结果，可能奠定你以后实验的思路的话，建议还是用新鲜的标本再做一次。最好是要验证RNA的完整性。
这种情况极有可能是引物降解了，通常引物降解的现象有两种，第一，原先能做出来现在做不出来了；第二，原先做出来的是一条亮带，现在做出现很多杂带或者是做不出来。你的模板按你说的没有问题，那就是引物的事儿了。
内参能P出来，说明PCR反应体系无问题，但目的P不出来不能说明DNA降解。最好做一个正对照，就是一定能把目的基因P出来的对照。
一般情况下，问题不大，pcr对纯度不敏感，可以试试再说。提取RNA测浓度时 A260/A280 大于3的原因可能是降解。一般对于DNA，纯净的时候比值是8，而对于RNA则是接近0。
定性的最长能达到2K以上。一般情况来说，越短扩增效率越高。RNA做RT-PCR也一样。DNA直接做PCR，而RNA则须先做RT-PCR，然后再进行荧光定量PCR扩增，目前市面上最常见的是一步法，将两个反应连接在一起完成。
2、RT-qPCR 基本原理
rtqpcr原理及应用如下：原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。
qRT-PCR原理 以基因的cDNA为模板进行PCR扩增，在PCR扩增过程中，通过收集荧光信号，对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期，模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系，所以可以定量。
RT-qPCR属于第二代PCR技术，与常规的PCR技术相比，RT-qPCR技术可对DNA起始模板进行定量，同时可以对整个扩增反应进行实时监控。
【q-RT-PCR技术】就是结合了荧光定量技术的反转录PCR（反转录是以RNA为模板，通过反转录酶，合成DNA的过程，是DNA生物合成的一种特殊方式）：先从RNA反转录得到cDNA（RT），然后用Real-time PCR进行定量分析（qPCR）。
3、荧光定量PCR,RNA降解了,能否继续?
加trizol之前为了使菌体裂解充分，一般使用液氮研磨的方式来破碎样本。样本中的转录本半衰期大概只有3~8分钟，你用溶菌酶处理的过程中，RNA的表达就发生了剧烈的变化，得到的RNA丰度已经不是你理想中的情况了。
不能。RNA分子被降解后无法再进行翻译或其他功能，但是，在某些情况下，RNA的碎片可能会保持一定的稳定性并继续存在一段时间。此外，在实验室条件下，研究人员可以从已经降解的RNA中提取部分片段进行进一步的分析。
相对定量PCR是能做的，但是做出来的真实性就不敢保证了。通过内参基因的矫正，可以作为你后续实验的借鉴。但是如果是非常重要的结果，可能奠定你以后实验的思路的话，建议还是用新鲜的标本再做一次。最好是要验证RNA的完整性。
PCR扩增原则上对你模板要求不高，因此单纯降解对PCR结果影响不大，除非你做长PCR，或者进行多态分析（如RAPD）。但是你单纯用酚-氯仿抽提，可能会造成DNA里面蛋白、酚、氯仿和其他杂质较多，因此会影响PCR结果。
如果轻度的降解，是能够做PCR的，但是，作PCR的意义已经不大了，因为你不知道有多少降解。定量就不准确了！所以，在提RNA的时候，所有用品都要用RNAase－free的用品，一般0.1％DEPC处理即可。
4、RNA浓度不同是否影响qpcr
如果你用的是病毒、少量细胞，浓度低一些也没有关系。纯度需要用仪器测一下。260/280理论值应该有0以上，260/230值2以上基本合格。RT-PCR：最重要的是RNA是否有明显降解，这个需要跑电泳看。
是的。模板浓度低，需要更多的循环数才能扩增出可检测到的产物，荧光强度与产物的量成正比。
是。rna蛋白污染是影响定量pcr的。PCR是聚合酶链式反应的缩写。聚合酶链式反应是一种用于放大扩增特定的DNA（或RNA）片段的分子生物学技术。在医学上主要用于细菌检测、病毒类疾病鉴定。
RNA纯度不高对后面实验影响非常大，浓度不高可能会影响实验效率，导致会有很大的误差。
5、RNA发生降解是否影响PCR的真实性?
~2是正常的，5太高了。有条带说明还没有全部被降解，但是用于定量已经完全不可靠了。
相对定量PCR是能做的，但是做出来的真实性就不敢保证了。通过内参基因的矫正，可以作为你后续实验的借鉴。但是如果是非常重要的结果，可能奠定你以后实验的思路的话，建议还是用新鲜的标本再做一次。最好是要验证RNA的完整性。
如果轻度的降解，是能够做pcr的，但是，作pcr的意义已经不大了，因为你不知道有多少降解。定量就不准确了！所以，在提rna的时候，所有用品都要用rnaase－free的用品，一般0.1％depc处理即可。
影响荧光PCR的因素很多，但从操作和技术上来讲应该要注意一下几点：RNA的完整性 因为RNA一旦降解所定量的结果就不能正确反映样品中mRNA的量，所得的结果也是错误的。
因为pcr是人工合成的引物，rna在体外不稳定，而且容易被rna酶污染，容易降解。所以用dna做pcr的引物。
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